（１） 細菌数（生菌数）
�@１平板に３０〜３００個のコロニーが得られるよう試料原液を段階希釈します。試料原液を１ｍｌを滅菌生理食塩水９ｍｌに混合し１０倍希釈液とし、同様に順次希釈し４段階程度調整します.

�A試料原液及び各段階に希釈した試料溶液を１試料溶液につき２枚の滅菌シャーレに各１ｍｌずつ分注します。

�B50℃に保温した標準寒天培地を約１５ml.分注し混釈します。

�C定温にて冷却凝固後､35℃±1.0℃ので艀卵器にて48±２時間倒置培養します。

�D数算定基準にもとづきコロニー数を計測し､」希釈倍率を乗じ１�p2あたりの生菌数を算出します。

（２）大腸菌（E.ｃｏｌｉ）及び大腸菌群

�@試料原液及び各段階に希釈した試料溶液を1試料溶液につき2枚の滅菌シャーレに各1mlずつ分注します。

�A50℃に保温したクロモカルト・コリフォーム寒天培地を約15ml分注し混釈します。

�B定温にて冷却凝固後、35℃±1.0℃の艀卵器にて１８〜２４時間倒置培養します。

�C農青色又は紫色コロニーを､大腸菌､赤色コロニーを大腸菌群と判定し､生菌数算定基準に基づきコロニー数を計測し､希釈倍率を乗じ､1ｃｍ2あたりの大腸菌数及び大腸菌群数を算定します。

�D濃青色又は紫色コロニーが未検出の場合は”大腸菌陰性”、”赤色コロニーが未検出の場合は"大腸菌群陰性"と判定します。

（３）黄色ブドウ球菌

�@試料原液及び各段階に希釈した試料溶液を1試料溶液につき2枚の卵黄加マンニット食塩培地に各０．１ｍｌずつ分注し塗沫します。

�A３５℃±１．０℃の艀卵器にて４８±３時間倒置培養します。

�B卵黄反応陽性の定型的コロニーが検出された場合は、普通寒天斜面培地に塗沫し、３５℃±１℃の艀卵器にて18〜２４時間培養し確認検査を行います。

�C確認検査は､グラム染色、コアクラ―ぜ試験、ＶＰ反応を行います。

�D確認検査の結果、”グラム陽性球菌””コアクラ―ぜ試験陽性””ＶＰ反応陽性”を示したものを”黄色ブドウ球菌陽性”と判定し、必要に応じて菌数を算出します。

（４） サルモネラ

�@試料原料にＥＥＭブイヨンを１０倍料加え、ストマッカ―にて２分間混合し、３５℃±１．０℃の艀卵器にて１８〜４時間培養します。

�AＥＥＭブイヨン培養液2mlをSBG培地１５ｍｌを加え43℃±１℃艀卵器にて18〜２４時間培養します。

�BSBG培地培養液から1白金耳をDHL寒天培地に塗沫し、３５℃±１℃の艀卵器にて18〜２４時間培養します。

�C硫化水素産生の定型的コロニーが検出された場合は、グラム染色及びTSI寒天培地、LIM寒天培地、SC培地にて確認試験を行います。

�D確認試験の結果、”グラム陰性無芽胞桿菌”及び生化学的性状でサルモネラの性状を示したものを”サルモネラ陽性”と判定します．また必要に応じてサルモネラ用診断用抗血清にて型別を行います。

（５）腸管出血性大腸菌O157

�@試料原液にノポピオシン加ｍEC培地を１０倍量加え、ストマッカ―にて2分間混合し、４２℃±１℃の艀卵器にて18〜２４時間培養します。

�Aノポピオシン加ｍEC培地培養液から1白金耳をCT/SMAC寒天培地に塗沫し、３５℃±１℃の艀卵器にて18〜２４時間培養します。

�Bソルビトール非分解のコロニーが検出された場合は、グラム染色及びCLIG寒天培地、TSI寒天培地、LIM培地にて確認試験を行います。

�C確認試験の結果、”グラム陰性無芽胞桿菌”及び生化学的性状で大腸菌の性状を示したものを病原大腸菌用血清にて血清型別を行います。

�D病原大腸菌診断用抗血清にてO157と確認されたものを”腸管出血性大腸菌O157陽性”と判定し、更にRPLA法にてVｅｒｏ毒素産生を確認します。

※資料提供、拭き取り検査委託先： （財）宮城県公衆衛生協会
保険衛生部・保健衛生課　TEL　022-771-4722